قویترین تکنیک برای ردیابی پروتئینها و اسیدهای نوکلئیک درون سلول با رنگ آمیزی فلئورسنت و مشاهده با میکروسکوپ فلئورسانس است. در این حالت فلئورسنت جذب شده بوسیله سلول، نور را در یک طول موج مشخص جذب میکند و آن را در یک طول موج بالاتر منتشر مینماید. در میکروسکوپهای فلئورسانس مدرن فقط نور فلئورسنتی که به وسیله نمونه نشر داده شده به شکل یک تصویر دیده میشود. هنگامی که یک رنگ پادتن فلئورسنت به سلول یا بافت خاصی برای کمپلکس شدن با پروتئین یا نوکلئیک اسید بخصوص اضافه و توسط میکروسکوپ فلئورسانس قابل مشاهده گردد؛ ایمونوفلئورسانس میکروسکوپی نامیده میشود. با رنگ آمیزی نمونه به کمک دو یا چند رنگ که در طول موج های مختلف فلئورسانس دارند میتوان چندین پروتئین را به همراه مکانهای آنها در سلول شناسایی کرد. در آزمایشگاههای تحقیقاتی از رنگ آمیزی های فلدورسنت اکریدین اورنج / اتیدیوم بروماید و هوچست(hochest) برای مشاهده قطعات DNA در پدیده آپوپتوز (مرگ برنامه ریزی شده سلولی) و از پادتن های فلئورسنت مختلف همچون پادتن آنتیاکتین برای مشاهده فیلامان های اکتین در درون سلول استفاده میشود.
Virology.mihanblog.com
عمومیترین میکروسکوپ هایی که امروزه مورد استفاده قرار میگیرند میکروسکوپهای نوری هستند. یک میکروسکوپ نوری از تنه ، پایه ، دسته ، صفحه شیئی ، سیستم نوری (منبع نور و کوندانسور و دیافراگم) و سیستم بزرگنمایی (عدسی شیئی و چشمی) تشکیل میشود. بزرگنمایی یک میکروسکوپ نوری طبق فرمول زیر محاسبه میشود :
بزرگنمایی میکروسکوپ نوری = بزرگنمایی عدسی چشمی × بزرگنمایی عدسی شیئی
توان یک میکروسکوپ نوری با توان تفکیک (resolution power)آن تعیین میگردد .توان تفکیک مهمترین ویژگی یک میکروسکوپ است. توان تفکیک میکروسکوپ را میتوان به صورت مقابل تعریف کرد : فاصله دو نقطه روی یک شیئ که میتوان در زیر میکروسکوپ جدا ازهم تشخیص داد. توان تفکیک از رابطه زیر بدست میآید:
=d
d = توان تفکیک
= طول موج نور
= ضریب شکست نور در محیط بین جسم و عدسی
= زاویه ای که به شعاع های خارج شده از نمونه که به طور عمود به مرکز عدسی میتابند.
با توجه به فرمول فوق هر چه طول موج نور وارده بیشتر باشد توان تفکیک بزرگتر شده وبزرگنمایی کمتر میشود و هرچه ضریب شکست بیشتر باشد توان تفکیک کوچکتر و بزرگنمایی بیشتر میشود. توان تفکیک میکروسکوپ نوری در حدود 5/. میکرومتر است.Virology.mihanblog.com