تبلیغات
ویروس شناسی - مطالب ابر جدا سازی مولکول ها
منوی اصلی
ویروس شناسی
علم اگر در ثریا باشد مردان و زنانی از سرزمین پارس بدان دست خواهند یافت
  • قوی ترین روش برای جدا سازی مولکول های مختلف کروماتوگرافی می‌باشد که براساس ویژگی های مختلف در بار الکتریکی ، اندازه ، میل ترکیبی اتصال و دیگر خصوصیات مولکول ها را جدا می‌کند و بر این اساس به انواع مختلف تقسیم می‌شوند.

    کروماتوگرافی فیلتراسیون ژلی (gel Filtration.chr)

    این نوع کروماتوگرافی که به کروماتوگرافی اختصاصی بر اساس اندازه نیز موسوم است ، مولکول ها را بر اساس اندازه جدا می‌کند. ستون کروماتوگرافی از یک پلیمر شبکه مانند با منافذی با اندازه مشخص پر شده است. مولکول های درشت تر و بزرگتر سریعتر از مولکول های کوچکتر از ژل عبور می‌کنند و به پایین ستون می‌رسند. علت این فرآیند آن است که مولکول های کوچک در منافذ متعدد ژل به دام می‌افتند و مولکول های درشتر به راحتی از کنار منافذ عبور می‌کنند و به ستون پایین می‌رسند.

    کروماتوگرافی تمایلی (Affinity.chr)

    این نوع کروماتوگرافی مولکول ها را براساس ویژگی اتصالشان جدا می‌کند. به عنوان مثال در مورد پروتئین ها، پروتئین های باقی مانده روی ستون ، آنهایی هستند که در اتصال با یک لیگاند خاص متصل باقی می‌مانند. بعد از اتصال پروتئین خاص به لیگاند ، پروتئین هایی که متصل نمی‌شوند از ستون شسته می‌شوند. پروتئین های متصل به لیگاند با روش ویژه‌ای بوسیله محلول شانل لیگاند آزاد از ستون شسته می‌شوند

    Virology.mihanblog.com

    آخرین ویرایش: جمعه 13 تیر 1393 03:34 ب.ظ
    ارسال دیدگاه


  • مولکول های آمینواسید و پروتئین ، نوکلئوتید ها و اسید نوکلئویک باردار هستند، این مولکول ها با توجه به بار خود در یک میدان الکتریکی با سرعت های متفاوت به سمت یکی از دو قطب مهاجرت می‌کنند. این فرآیند را الکتروفورز می‌گویند. در این روش علاوه بر بار الکتریکی انداره و شکل مولکل (ساختار فضایی) در مهاجرت آن نقش اساسی دارد به طوری که هر چه وزن بیشتر باشد حرکت مولکول کندتر است.الکتروفورز را به کمک نوعی ژل انجام می‌دهند. معروف ترین ژل برای الکتروفورز پروتئین ها پلی آکریل آمید و در مورد اسید نوکلئویک ها آگارز می‌باشند. اساس کار به طریقی است که ژل جدا کننده را بر اساس غلطت درون دستگاه گذاشته و روی آن با محلول بافر مورد نظر پوشیده می‌شود. بعد از اینکه نمونه‌های مورد نظر را درون چاهک های ژل ریخته‎اند جریان الکتریکی توسط دستگاه تنظیم شده و مولکول ها در ژل براساس بار الکتریکی و اندازه و وزن شروع به حرکت می‌کنند. بهترین راه برای ارزیابی همگونی و خلوص یک ترکیب پروتئینی انجام الکتروفورز آن روی ژل پلی اکریل آمید(PAGE) در شرایط مختلف است. به عنوان مثال در سدیم دودسیل سولفلت-پلی اکریل آمید ژل ، سدیم دو دسیل سولفات(SDS) به عنوان یک درتژنت با بار منفی تمام بارهای پروتئین را می‌پوشاند و پروتئین فقط براساس اندازه و وزن جدا می‌شود. در PAGE دو بعدی در بعد نخست پروتئین ها تغییر ماهیت داده، براساس مقدار نقطه ایزوالکتریک (PHi) خود جدا می‌شوند و در بعد دوم جداسازی پروتئین ها بعد از مواجه شدن پروتئین با SDS ، بر اساس اندازه مولکولی واحدهای آنها انجام می‌گیرد.

    ایزوالکتریک فوکوسینگ (if) نوعی الکتروفورز است که پروتئین ها براساس نقطه ایزوالکتریک‌شان (PHi) جدا می‌شوند. به طوری که ‌می‌توان گفت که در ژل پلی اکریل آمید دو بعدی ، یک بعد بر اساس SDS-PAGE و بعد دیگر براساس الکتروفورز if پروتئین ها را جدا می‌کند

     

    Virology.mihanblog.com

    آخرین ویرایش: جمعه 13 تیر 1393 03:50 ب.ظ
    ارسال دیدگاه